XXX 产品 HPLC 分析方法
确 认 方 案 XXX 产品 HPLC 分析方法
确 认 方 案
XXX 制药有限公司
确认方案审批表
确认方案审批表 确认方案名称: XXX 产品 HPLC 分析方法确认方案 确认方案编号：KY-ZL-YZ-FF-00400
审批 程序 部门 签名 日期 起草 检验室
审核 检验室主任
质量保证部
批准人 质量负责人
目
录
1
概述 2
确认目的 3
确认范围 4
确认小组成员与职责 5
确认方案的审核与批准 6
进度计划 7
确认内容 8
变更与偏差 9
确认结果与评价报告 10 确认合格证书
1
概述 我公司产品 XXX 产品采自《中国药典》2010 年版二部，含量及有关物质、A、B、C的检验均使用高效液相色谱仪进行检验，两个检验项目检验参数等条件完全相同，且
我公司未对《中国药典》2010 年版二部中的方法进行过任何改变，因此按照 2010 新版GMP 要求，需要进行分析方法确认。本确认方案使用 LC-2010AH 型高效液相色谱仪对XXX 产品采用《中国药典》2010 年版二部“含量”、“有关物质”及“A、B、C”的检验方法进行确认，证明此方法在本公司实验室的适用性。根据《药品 GMP 指南（质量控制实验室与物料系统）》分册要求，“含量”、“有关物质”及“A、B、C”项需确认项目如下：
确认项目 准确度 精密度 专属性 定量限 含量 是 是 是 否 有关物质 否 是 是 是 A、B、C 否 是 是 是 “是”代表该项内容需确认，“否”代表该项内容不需要确认 2 2 确认目的 通过对 XXX 产品含量及有关物质 A、B、C 的检验方法的确认，证明此方法在本公司实验室的适用性。
3 3 确认范围 本确认方案适用于 XXX 产品含量及有关物质 A、B、C、的检验方法进行确认。
4 4 确认小组成员与职责
部门及职务 确认工作中职责 检验员 确认执行人：负责起草确认方案，执行确认方案，负责验 证过程中相关的检验操作，收集整理数据，起草确认报告。
质量保证部 负责确认方案、确认报告审核；审核确认过程中发生偏差的解决方案，以及采取纠正行动。
检验室主任 确认小组组长：组织确认实施，负责确认方案的审核、组织起草确认报告并审核。
质量负责人 确认总负责人：负责确认方案、报告的批准 5 5 确认方案的起草与审批
5.1 确认方案的起草与审批：确认方案由检验室起草，确认小组会审，质量负责人批准实施。
5.2 确认方案的培训：确认方案经批准后，实施前由确认方案的起草部门组织确认方案的参与者进行培训。
5.3 确认方案的修改：确认方案如需修改，由质量负责人批准实施，在确认报告中体现。
6
进度计划
整个确认活动实施时间：
确认时间：从_____年___月__日 至_____年__ 月__ 日； 起草报告：从_____年___月__日 至_____年__ 月__ 日； 7
确认内容 7.1 确认前仪器及材料检查 7.1.1 确认前，对下列试验用仪器和材料进行检查 7.1.1.1 岛津
高效液相色谱仪
7.1.1.2 TG-332A 型分析天平
7.1.1.3 色谱柱：C18（4.6*250 ㎜）
7.1.1.4 对照品和试剂：产品 X 二醇物对照品、对硝基苯甲醛对照品、产品 X 对照品、羟苯甲酯对照品、羟苯乙酯对照品、羟苯乙酯对照品、庚烷磺酸钠，乙腈（色谱级），甲醇（色谱级），磷酸二氢钾、三乙胺、磷酸、蒸馏水 7.1.1.5 其他一些辅助的玻璃仪器（如量瓶、移液管等）
7.1.2 可接受标准：仪器和用具经校验且在效期内；对照品、试液、试剂与试药符合验证要求且在效期内；色谱柱使用状态正常。
7.1.3 结果记录：将结果记录在附件 1《确认前仪器及材料检查表》 中。
7.2 确认涉及文件检查 7.2.1 确认前，对与此次确认相关的文件进行检查 7.2.1.1XXX 产品成品检验操作规程（KY-ZL-SOP-CP-00400）
7.2.1.2
型高效液相色谱系统标准操作及维护保养规程（KY-SB-SOP-JY-03700）
7.2.1.3
型高效液相色谱系统维护保养及清洁操作规程
（KY-WS-SOP-JY-03700）
7.2.1.4TG-332A 型分析天平标准操作规程（KY-SB-SOP-JY-02300）
7.2.1.5TG-332A 型分析天平维护保养及清洁标准操作规程（KY-WS-SOP-JY-02300 7.2.1.6 高效液相色谱法标准操作规程 （KY-ZL-SOP-ZK-03300）
7.2.1.7XXX 产品 HPLC 分析方法的验证方案（KY-YZ-SOP-JY-00400）
7.2.1.8XXX 产品生产工艺规程（KY-SC-JB-GY-00400）
7.2.1.9 检验方法验证（确认）管理程序（KY-ZL-SMP-05800）
7.2.2 可接受标准：所有文件都应为现行版本，且经过批准。
7.2.3 结果记录：将结果记录在附件 2《确认前文件检查表》中。
7.3 人员培训确认 7.3.1检查并确认所有参与执行确认的人员是否已得到培训，并在培训记录上签字。
7.3.2 可接受标准：验证小组成员均已经过培训，并在培训记录上签字。
7.3.3 确认结果：将确认结果填入附件 3《人员培训、参与情况确认记录》中。
7.4
确认项目 7.4.1 “含量”项确认 7.4.1.1 重复性/准确度
7.4.1.1.1 空白基质的制备：精密称定硼酸：13.125g 硼砂：0.6g 玻璃酸钠：1g 羟苯乙酯：0.5g 按照 XXX 产品生产工艺规程（KY-SC-JB-GY-00400）配制加注射用水至1000ml。
7.4.1.1.2 对照液制备：称取产品 X 对照品用注射用水配制成 1ml 含 2.5mg 的溶液，取本品用流动相定量稀释制成每 1ml 中含 0.1mg 的溶液摇匀，作为对照液备用。对照液平行制备 2 份，标识为 S-1、S-2（浓度为标示量的 100%）。
7.4.1.1.3 样品制备：称取产品 X 对照品用空白基质水溶解后定容，摇匀，备用。平行制备浓度梯度为标示量 80%、100%、120%的样品各 3 份，标识为 A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9。
7.4.1.1.4 照《高效液相色谱仪标准操作规程》测定。
色谱条件与系统适用性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相 A 为0.01mol/L 庚烷磺酸钠缓冲溶液（取磷酸二氢钾 6.8g，用 0.01mol/L 庚烷磺酸钠溶液溶解并稀释至 1000ml，再加三乙胺 5ml，混匀，用磷酸调节 PH 值至 2.5），流动相 B 为
甲醇；检测波长为 277nm；按下表进行线性梯度洗脱。另取产品 X 对照品、产品 X 二醇物对照品、对硝基苯甲醛对照品、羟苯甲酯、羟苯乙酯与羟苯丙酯对照品各适量，加甲醇适量（产品 X 每 10mg 加甲醇 1ml）使溶解，用流动相定量稀释成每 1ml 中含产品X0.5mg、产品 X 二醇物 40ug 与对硝基苯甲醛 3ug、羟苯甲酯 40ug、羟苯乙酯 50ug 和羟苯丙酯 20ug 的混合溶液。精密吸取该溶液 10µl 注入色谱仪，作为系统适用性溶液。记录色谱图。各相邻峰间的分离度均应符合要求）（应大于 1.5）。
时间（分钟）
流动相 A(%) 流动相 B(%) 0 15 40 50 60 68 68 35 68 68 32 32 65 32 32 7.4.1.1.5 测定：精密量取上述 A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9 溶液用流动相定量稀释制成每 1ml 中含 0.1mg 的溶液，摇匀，精密量取 10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图。
1）取 S-1 精密量取 10ul，注入液相色谱仪记录色谱图，该溶液连续进样 2 针。
2）取 S-2 精密量取 10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图，该溶液连续进样 1 针。
3）分别精密量取稀释后的 A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9 溶液各 10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图。
4）计算 S-1 和 S-2 的 F 值，相对标准偏差应≤2.0%，以外标法计算稀释后的 A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9 溶液的含量。
结果计算 含量（cx）=CR×Ax/AR cx-------- 为供试品的浓度； CR---------为对照品的浓度； Ax-------- 为供试品的峰面积； AR---------为对照品的峰面积。
7.4.1.1.6 可接受标准：稀释后的 A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9 各浓度的含量均应在标示量的±3%，且各浓度样品含量的 RSD%值应≤2.0%。
7.4.1.1.7 确认记录和数据 确认数据和结果记录于附件 4《含量精密度/准确度确认数据和结果》中。
7.4.1.2 专属性 7.4.1.2.1 测试方法：
7.4.1.2.1.1 取空白基质进样 1 针，记录色谱图。
7.4.1.2.1.2 精密量取样品（用成品即可）用流动相 A-B（68：32）定量稀释制成每1ml 中含产品 X0. 1mg 的溶液，作为供试品溶液，精密量取 10ul，注入液相色谱仪，进样 1 针，记录色谱图，获得产品 X 的保留时间。
7.4.1.2.1.3 取产品 X 对照品用流动相定量稀释制成每 1ml 中含产品 X0. 1mg 的溶液，作为对照品溶液，注入液相色谱仪，进样 1 针，记录色谱图，获得产品 X 的保留时间。
7.4.1.2.1.4 可接受标准：溶剂空白相应的峰对样品测定有无明显的干扰；供试品图谱中产品 X 主峰保留时间与对照品图谱中产品 X 主峰保留时间一致。
7.4.1.2.1.5 确认记录和数据 确认数据和结果记录于附件 5《专属性确认数据和结果》中。
7.4.2 “有关物质”及“A、B、C”项确认 7.4.2.1 专属性 7.4.2 .1.1 精密量取样品（用成品即可）用流动相 A-B（68：32）定量稀释制成每 1ml中含产品 X0.5mg 的溶液，作为供试品溶液。
7.4.2 .1.2 对照溶液；取产品 X 对照品、产品 X 二醇物对照品、对硝基苯甲醛对照品、羟苯甲酯、羟苯乙酯与羟苯丙酯对照品各适量，加甲醇适量（产品 X 每 10mg 加甲醇 1ml）使溶解，用流动相定量稀释成每 1ml 中含产品 X0.5mg、产品 X 二醇物 40ug 与对硝基苯甲醛 3ug、羟苯甲酯 40ug、羟苯乙酯 50ug 和羟苯丙酯 20ug 的混合溶液。作为对照溶液；照含量项下的色谱条件，取对照品溶液 10ul，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使产品 X 二醇物的峰高约为满量程的 64%。
7.4.2 .1.3 精密量取供试品溶液与对照品溶液各 10ul，分别注入液相色谱仪，进样 1针，记录色谱图。
7.4.2 .1.4 可接受标准：供试品图谱中产品 X、产品 X 二醇物、对硝基苯甲醛、羟苯甲酯、羟苯乙酯和羟苯丙酯各峰的保留时间与系统适用性图谱中相对峰的保留时间一致。溶剂空白相应位置无峰的干扰。
7.4.2 .1.5 确认记录和数据 确认数据和结果记录于附件 5《专属性确认数据和结果》中。
7.4.2.2 精密度 7.4.2.2.1 测试程序 7.4.2.2.1.1 取含量项下系统适用性溶液作为对照溶液 D-1；另按同法制备一份对照品作为对照溶液 D-2。
7.4.2.2.1.2 取样品用含量测定项下的流动相 A-B（68：32）定量稀释制成每 1ml 中含产品 X0.5mg 的溶液，配制 6 分平行样品作为供试品溶液分别为 B-1～B-6。
7.4.2.2.1.3 D-1 进样 2 针，D-2 进样 1 针，然后 B-1～B-6 分别进针，记录色谱图。
7.4.2.2.1.4 各相邻峰之间的分离度应≥1.5 7.4.2.2.1.5 计算 D-1 和 D-2 的 F 值，相对标准偏差应≤2.0%，以外标法计算 B-1、B-2、B-3、B-4、B-5、B-6 溶液中各有关物质的含量。
计算：产品 X 二醇物（%）=S 二醇物 ×C 二醇物对照 / S 二醇物对照 ×C 供试品 ×100% 对硝基苯甲醛（%）=S 对硝基苯甲醛 ×C 对硝基苯甲醛对照 / S 对硝基苯甲醛对照 ×C 供试品 ×100% 羟苯甲酯（%）=S 羟苯甲酯 ×C 羟苯甲酯醛对照 / S 羟苯甲酯对照 ×C 供试品 ×100% 羟苯乙酯（%）=S 羟苯乙酯 ×C 羟苯乙酯对照 / S 羟苯乙酯对照 ×C 供试品 ×100% 羟苯丙酯（%）=S 羟苯丙酯 ×C 羟苯丙酯对照 / S 羟苯丙酯对照 ×C 供试品 ×100% 7.4.2.2.1.2 可接受标准：6 个样品 B-1、B-2、B-3、B-4、B-5、B-6 含量的 RSD%值应≤2.0%。
7.4.2.2.1.3 确认记录和数据 确认数据和结果记录于附件 6《有关物质及 A、B、C 精密度确认数据和结果》中。
7.4.2.3 定量限 7.4.2.3.1 在上述色谱条件下取产品 X 二醇物对照品用流动相稀释成每 1ml 中含产品 X二醇物 40ug 的溶液，进样，再逐步稀释置适当的浓度，进样，直至当待测组分的信噪比约为 10 倍时（即产品 X 二醇物峰高为噪音峰高约 10 倍时），对应的浓度为该组分的最小定量浓度(Cm 2 )，重复进样 3 次，记录色谱图。
7.4.2.3.2在上述色谱条件下取对硝基苯甲醛对照品用流动相稀释成每1ml中含对硝基苯甲醛 3ug 的溶液,进样，再逐步稀释置适当的浓度，进样，直至当待测组分的信噪比约为 10 倍时（即对硝基苯甲醛峰高为噪音峰高约 10 倍），对应的浓度为该组分的最小
定量浓度(Cm 2 )，重复进样 3 次，记录色谱图。
7.4.2.3.3 因本公司产品中加入的是羟苯乙酯，故只做羟苯乙酯的定量限，上述色谱条件下取对硝基苯甲醛对照品用流动相稀释成每 1ml 中羟苯乙酯 50ug 的溶液,进样，再逐步稀释置适当的浓度，进样，直至当待测组分的信噪比约为 10 倍时（即对硝基苯甲醛峰高为噪音峰高约 10 倍），对应的浓度为该组分的最小定量浓度(Cm 2 )，重复进样 3次，记录色谱图。
7.4.2.3.2 计算公式
式中：h i ：测试溶液中产品X二醇物、对硝基苯甲醛的峰高；
h b ：基线噪声的峰高；
h 0 ：空白溶液的色谱图中基线的峰高。
7.4.2.3.3 可接受标准：上述杂质的定量限应小于产品中各类杂质限度标准的 10%。
7.4.2.3.4 确认记录和数据 确认数据和结果记录于附件 7《定量限确认数据和结果》中。
8
变更与偏差 若确认方案需要变更，须按方案制定时的审批程序进行批准；若系统发生重大变更，应重新制定确认方案。
确认过程中应严格按照本确认方案执行，出现个别项目不符合标准结果时，应按偏差管理规程进行处理，有异常事项未解决时，不得进行下一步的工作。
所有偏差、异常情况处理过程均应记录备案，并登记到附件 8 中。
9
确认的结果与评价报告 由质量保证部和检验室主任对分析方法确认的结果进行审核，检查所有测试项目已经完成；变更和偏差都已经得到解决和批准；每个项目均应符合它们的确认可接受标准；确认记录完整。由检验室填写确认报告，由确认小组长在报告中签署评审结论，提交确认总负责人进行批准。附件 9 中。
10 确认合格证书 确认的结果与评价报告经批准人批准签字后，质量受权人签发验证合格证书。附
件 10。
附件目录
附件目录 附件 附件名称 附件 1 确认前仪器及材料检查表 附件 2 确认前文件检查表 附件 3 人员培训、参与情况确认记录 附件 4 含量精密度/准确度确认数据和结果 附件 5 专属性验证数据和结果 附件 6 有关物质及 A、B、C 精密度确认数据和结果 附件 7 定量限确认数据和结果 附件 8 变更偏差情况确认记录 附件 9 确认结果与评价报告
附件 10 确认合格证书
附件 1 确认前仪器及材料检查表
附件 1 确认前仪器及材料检查表 序号
名
称
仪器编号
试液、试药批号 证书编号
有效期至
确认标准
确认结果
确认所用的仪器经过校验且在有效期内，试药、试液均在有效期内，标准滴定液经过标定且在有效期内。
确认结论：
检查人/日期
复核人/日期
附件 2
确认前文件检查表
附件 2
确认前文件检查表 文件名称 文件编号 是否现行文本 检验方法验证（确认）管理程序
KY-ZL-SMP-05800
TG -332A 型分析天平标准操作规程
KY-SB-SOP-JY-02300
TG-332A 型分析天平维护保养及清洁标准操作规程 KY-WS-SOP-JY-02300
LC-2010AHT 型高效液相色谱系统标准操作规程
KY-SB-SOP-JY-03700
LC-2010AHT 型高效液相色谱系统维护保养及清洁标准操作规程
KY-SB-SOP-JY-03700
高效液相色谱法标准操作规程
KY-ZL-SOP-ZK-03300
XXX 产品成品检验操作规程 KY-ZL-SOP-CP-00400
XXX 产品生产工艺规程 KY-SC-JB-GY-00400
XXX 产品 HPLC 分析方法的确认方案 KY-YZ-SOP-JY-00400
检查人
检查日期
检查结果
附件 3
人员培训、参与情况确认记录
附件 3
人员培训、参与情况确认记录 授课地点
日
期
授课内容
部门 职务 培训人 检验室 检验室主任
部门 职务 受培训并参与方案实施人员 检验室 检验员
检验室 检验员
质量保证部 质监处处长
质量保证部 质量授权人
确认标准 确认结果 确认所有参与执行本确认的人员已经得到培训，并在培训记录中签字。
确认结论：
检查人/日期
复核人/日期
附件 4
含量精密度/准确度确认数据和结果 1
S-1 No 1 2 3 平均值 RSD 产品 X 峰面积
2
S-2 No 1 2 平均值 RSD 产品 X 峰面积
3 80%浓度 No A-1 A-2 A-3 平均值 RSD 含量 产品 X 峰面积
4 100%浓度 No A-4 A-5 A-6 平均值 RSD 含量 产品 X 峰面积
5 120%浓度 No A-7 A-8 A-9 平均值 RSD 含量 产品 X 峰面积
6 确认结论 可接受标准 验证结果 是否符合 各浓度含量的 RSD%值应≤2.0%
各浓度的含量均应在标示量的±3%
确认结论：
检查人/日期
复核人/日期
附件 5
专属性验证数据和结果 附件 5
专属性验证数据和结果 确认项目 对照品 保留时间 样品 保留时间 检验结果 检验人 检验日期含量专属性 产品 X
有关物质 专属性 产品 X 二醇物
对硝基苯甲醛
羟苯甲酯
羟苯乙酯
羟苯丙酯
检验人/日期
复核人/日期
备注 附检验原始记录 确认结论：
检查人/日期
复核人/日期
附件 6
有关物质及 A、B、C 精密度确认数据和结果
有关物质及 A、B、C 精密度确认数据和结果 1
D-1 No 1 2 3 RSD 平均值 产品 X 二醇物的峰面积
对硝基苯甲醛的峰面积
羟苯甲酯的峰面积
羟苯乙酯的峰面积
羟苯丙酯的峰面积
2
D-2 No 1 2 RSD 平均值 产品 X 二醇物的峰面积
对硝基苯甲醛的峰面积
羟苯甲酯的峰面积
羟苯乙酯的峰面积
羟苯丙酯的峰面积
3 样品 No 产品 X 二醇物 的峰面积 对硝基苯甲醛的峰面积羟苯甲酯的峰面积 羟苯乙酯的峰面积 羟苯丙酯的峰面积 B-1
B-2
B-3
B-4
B-5
B-6
RSD
平均值
含量
4 确认结论 可接受标准 验证结果 是否符合 各有关物质含量的 RSD%值应≤2.0%
确认结论：
检查人/日期
复核人/日期
附件 7 定量限验证数据和结果 1.定量限测定结果 项目 名称 信噪比 最小定量浓度 （µg/mL）
产品 X 二醇物
对硝基苯甲醛
羟苯乙酯
检验人/日期
复核人/日期
2 确认结论
确认结论：
检查人/日期
复核人/日期
附件 8 变更偏差情况记录
变更偏差情况记录
序号 发生日期 偏差/变更内容描述 处理措施 签名/日期
确认标准 确认结果
在本方案实施过程中所发生的偏差或变更，已处理完毕并已作好记录。
确认结论：
检查人/日期
复核人/日期
附件 9 确认结果与评价报告附件 9 确认结果与评价报告
分析方法名称
验证参加人员
验证时间
年
月
日至
年
月
日 检测项目 验证情况 是否通过 1 精密度
3 专属性
4 定量限
质量保证部确认结论:
签名/日期：
验证小组长评审结论：
签名/日期：
验证总负责人批准意见：
签名/日期：
附件 10
XXX 制药有限公司 确 认 合 格 证 书
项目名称：
XXX 产品 HPLC 分析方法
根据我国 GMP 要求，依据我公司《验证管理文件》，经对该项目进行验证，结果符合要求。
特发此证
签发人：
年
月
日